Her kan du oprette sCRAM (suboptimal protospacer adjacent motif (PAM)-medieret CRISPR RNA og Cas12a nuklease kombineret med multienzyme isotermisk hurtig amplifikation), en hurtig og ekstraktionsfri-diagnostisk platform, der detekterer ASFV inden for 20 min. sCRAM integrerer et hurtigt nukleinsyrefrigivelsestrin (40 grader, 5 min) med en-rørsreaktion, der kombinerer multienzyme isotermisk amplifikation (MIRA) og en suboptimal PAM-medieret CRISPR/
Cas12a-system (37 grader, 15 min), som muliggør instrument-fri visuel udlæsning via UV-lys eller laterale flowstrimler (LFS). sCRAM demonstrerer enkelt-kopidetektionsfølsomhed og udviser ingen kryds-reaktivitet med fem almindelige svinepatogener (PRRSV, PPV, JEV, PCV). Evalueringen af 111 simulerede og kliniske prøver (inklusive blod, plasma og podninger) afslørede en 100 % overensstemmelse med qPCR for UV-aflæsning og 98,20 % for LFS
udlæsning, hvor begge metoder udviser 100 % specificitet. Enkelheden, hastigheden og tilpasningsevnen i sCRAM understreger dets potentiale for decentraliseret ASFV-overvågning i ressourcebegrænsede-indstillinger, hvilket tilbyder et kraftfuldt værktøj til inddæmning af udbrud.
I denne undersøgelse udviklede vi sCRAM, en hurtig og felt{0}udrullelig ASFV-detektionsplatform, der integrerer suboptimal PAM-medieret CRISPR/Cas12a med multienzym isotermisk amplifikation. Analysen opnår enkelt-kopi 1 kopi/uL-følsomhed inden for 20 minutter og viser ingen kryds-reaktivitet med større svinepatogener. Klinisk validering på tværs af blod-, plasma- og podningsprøver viste fuld overensstemmelse med qPCR ved hjælp af UV-lysaflæsning og 98,20 % nøjagtighed via laterale flow-strimler. Med forenklet betjening, høj følsomhed og specificitet og visuel resultatfortolkning tilbyder sCRAM et stort potentiale for -på stedet ASFV-overvågning og bredere-omsorgsdiagnostiske-applikationer.
