RPA-CRISPR/Cas12a-systemet i denne undersøgelse opnår hurtig (30-40 min), ultra-følsom (1 kopi/μL) HCMV-detektion ved at målrette mod det tidlige-udtrykte UL123-gen, hvilket overgår konventionelle metoder i klinisk prøvetestning. Denne innovation af{1} lavbelastningsinfektioner,{9}muliggør{9}til tid især hos immunkompromitterede patienter og understreger gennemførligheden af CRISPR-baseret diagnostik til forbedring af behandlingen af HCMV-relaterede sygdomme. Analysens enkelhed og effektivitet fremhæver dens potentiale som et-punkt{15}}plejeværktøj til ressourcebegrænsede-indstillinger.
Mønstre for RPA-amplifikationssteder og sætvalg.
(A) RPA-primerdesign vedrørende placeringen af amplifikationsfragmenter. Pile angiver basepositionerne fra begyndelsen til slutningen af det amplificerede fragment med P1-P6-primerne.
(B) Agarosegelelektroforesebilledet af RPA-produktet amplificeret med 6 HCMV-primersæt.
(C) Screening af amplifikationseffektiviteten af RPA-kits fra forskellige virksomheder. P: Primer, NC: Negativ kontrol.
Resultaterne indikerede, at AmpFuture-kittet udviste den højeste amplifikationseffektivitet.
Sammenligning af positive rater af MIRA-CRISPR/Cas12a, PCR - Fluorescent Probe Method og qPCR i kliniske prøver.
Vi indsamlede blod- og urinprøver fra 48 kliniske patienter. Genomisk DNA blev ekstraheret fra disse prøver ved hjælp af TIANamp Genomic DNA Kit, og resultaterne af UL122-detektion blev analyseret via PCR-fluorescerende probemetoden. Ved at sammenligne vores resultater med kliniske diagnoser identificerede vores metoder 6 positive prøver, der var negative i kliniske tests.
