Staphylococcus haemolyticus er en gram-positiv koagulase-negativ bakterie, der er meget almindelig på hospitaler. I de senere år har hospitalets erhvervede infektioner fået stigende opmærksomhed på grund af deres højere risiko. Staphylococcus haemolyticus kan yderligere forårsage hudinfektioner, meningitis, peritonitis og endda sepsis. Forsinkelser i klinisk diagnose kan føre til forværring af sundhedsstatus, så hurtig diagnose af S. haemolyticus er nøglen til præcis behandling.
Forskningsteamet af lærer Ji Tuo fra Central Laboratory Department of the Second People's Hospital of Lianyungang, Kina offentliggjorde en artikel "En hurtig og visuel detektion af Staphylococcus haemolyticus i kliniske prøver med MIRA-LFS" i tidsskriftet "Analytica Chimica Acta", med en påvirkningsfaktor på 6,2.
1.undersøgelsesoversigt
I denne undersøgelse blev der etableret en MIRA-LFS-metode baseret på MVAA-genet for at detektere Staphylococcus haemolyticus. Det isotermiske nukleinsyreforstærkningsteknologi Mira blev kombineret med lateral flowteststrimmel LF'er for at opnå hurtig patogendetektion.
Eksperimentet blev udført ved 37 grader, og resultaterne kunne påvises inden for 9 minutter. Detektionsfølsomheden var 0. 147CFU/reaktion.
MIRA-LFS-detektionsmetoden er velegnet til fastpunktsdetektion af Staphylococcus hemolyticus i kliniske prøver, der realiserer POCT-metoden til identificering af Staphylococcus hemolyticus, som er af stor værdi for hurtig sygdomsdiagnose og behandling i områder med uberverede medicinske tjenester.
Forskningsteamet brugte MIRA-LF'er, QPCR og traditionelle bakteriekulturmetoder til at analysere 95 tilfældige kliniske prøver og bekræftede den kliniske anvendelighed.
2. Undersøgelsesmetoder
Det skematiske diagram af MIRA-LFS-detektion er vist ovenfor.
Forskningen anvendte AMP-fremtid Biotechs DNA-isotermiske hurtige amplifikationssæt (kolloidal guldteststrimmel) og nukleinsyretektionsteststrimler.
MVAA -genprimerlængden er 30-35 nukleotider, og amplifikationsproduktlængden er 100-350 bp. I alt 6 par kandidatprimer blev designet. MIRA -analyse blev udført under anvendelse af GDNA af standard Staphylococcus hemolyticus -stammer, kandidatprimere blev screenet, og amplifikationsprodukter blev vist under anvendelse af 2% agarosegelelektroforese.
Design derefter sonden baseret på den forreste primersekvens (forlænger 16 bp bagud). Den 5 'ende af sonden blev mærket med FITC, og 3' enden blev mærket med C3 -blokering. Brug THF til at erstatte det 31 nukleotid i sonden. THF er 30 bp fra 5 'enden og 15 bp fra 3' enden. Den 5 'ende af den valgte omvendte primer er mærket med biotin.
Desuden optimerede forskerteamet reaktionsbetingelserne for MIRA-LFS-påvisning af Staphylococcus hemolyticus. Test ved 37 grader med intervaller på 2 minutter fra 4 til 12 minutter. Resultaterne vises ved 8 minutters reaktionstid, og testlinjen er tydeligt synlig. Derudover udføres tests med intervaller på 5 grader fra 22-52 grad. 37-42 grad er den mest passende temperatur til MIRA-LFS-detektion. Derfor er den optimale reaktionstid og temperatur af MIRA-LFS-metoden til Staphylococcus haemolyticus henholdsvis 8 minutter og 37 grader. Sammen med det endelige resultat visualiseres af LFS inden for 1 minut, er den samlede detektionstid 9 minutter.
3. Eksperimentelle resultater
Følsomhedsverifikation
MIRA-LFS-assay blev udført på forskellige koncentrationer af genomisk DNA (GDNA) opnået fra serielt fortyndet staphylococcus haemolyticus-kulturer (1 0^6-10^0 CFU/ml).
Probabilistisk enhedsregressionsanalyse viste, at 95% LOD bestemt af MIRA-LFS-assayet var 0. 147 CFU/reaktion.
Specificitetsverifikation
Ved at analysere 18 almindelige patogene mikrobielle stammer og 15 kliniske Staphylococcus haemolyticus-stammer blev selektiviteten af MIRA-LFS-påvisning af Staphylococcus haemolyticus bestemt. Resultaterne viste, at MIRA-LFS-testen var negativ for 18 andre patogene bakterier og positive for 15 verificerede kliniske prøver af Staphylococcus haemolyticus.
MIRA-LFS-detektion er meget selektiv og egnet til screening af Staphylococcus hemolyticus.
Faktisk prøvetest
Lianyungang Second People's Hospital indsamlede tilfældigt 95 prøver, inklusive 35 hud- og blødt vævsprøver, 16 urinprøver, 14 sputumprøver og 30 blodprøver.
Resultaterne viste, at detektionsmetoden var 100% i overensstemmelse med QPCR -metoden. Sammenlignet med guldstandarden (GB/T4789. 11-2003) var følsomheden og specificiteten af MIRA-LFS-detektionsmetoden til identifikation af Staphylococcus hemolyticusinfektion 100% og 98,73%. Disse resultater verificerede yderligere den tekniske gennemførlighed af denne metode til påvisning af Staphylococcus hemolyticus i kliniske prøver.
MIRA-LFS-metoden bruges til hurtig POCT-detektion af Staphylococcus hemolyticus. Det er effektivt, nøjagtigt, enkelt og billigt og hjælper med at stille hurtig diagnose og behandlingsbeslutninger.
Lær om Mira -teknologi
AMP-Futures multi-enzym isotermiske hurtige nukleinsyreforstærkningsteknologi forstærker nukleinsyrer ved en konstant temperatur på 39 grader -42 grad med en reaktionstid på kun 5-20 minutter. Derudover er der ikke påkrævet strenge laboratorieforhold, og applikationsscenarierne er diversificeret: Generelle hospitalets laboratorieafdelinger, primærpleje, hjemmeprøvning, felter osv.
Reagensproduktformer er forskellige: frysetørret pulver, frysetørrede mikrosfærer osv.; Displayresultater er forskellige: gelelektroforese, fluorescenskurve, kolloidale guldteststrimler osv. Reagenset har stabil ydeevne, er let at betjene og er praktisk til opbevaring og transport.
Med Mira som kerneplatformteknologi har den udviklet en række understøttende produkter, såsom "ultrahurtig nukleinsyrefrigivelsesteknologi", "dobbeltkanals isotermisk fluorescensdetektor", "integreret fuldt automatisk lukket detektionssystem", "selvtestning af nukleinsyre-detektionsenhed" osv. Opret en overordnet løsning til hurtig moleculær detektion.